Программа определение группы крови как ей пользоваться. Метод перекрестной реакции. Как определить группу крови, используя цоликлоны

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стан­дартным эритроцитам (перекрестный способ),

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (І), А (II), В (III), АВ (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная ки­слота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаива­ния сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, ко­торые сразу же запаиваются или герметично закупориваются.

Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютини­рующим сывороткам:

1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течение 15-20 с. а через 2 мин. она должна быть четкой;

2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и пер­вой групп:

3. титр сыворотки должен быть не ниже 1: 32;

4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязне­ния, прозрачной;

5. каждая ампула должка иметь паспорт с обозначением груп­пы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы.

Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изогемагг­лютинирующих сывороток: 0(1)- не окрашивается, А(II) - синий цвет, В(III) - розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично за­крытыми, в темном месте, лучше в холодильнике.

Понятие о титре

Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроци­тами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эрит­роцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворот­ки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При оп­ределении титра сыворотки, постоянной величиной являются стан­дартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоян­ной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относи­тельное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к ис­пытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть дру­гой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода оп­ределения. При определении капельным методом на тарелке у здоро­вых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше.

Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он по­вышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболева­ниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процессов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыво­ротки остается почти неизменным.

Зависимость реакции агглютинации от физико-химических условий

На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд фи­зических и химических факторов.

Температура. При низкой температуре происходит неспецифи­ческая "холодовая агглютинация". Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. "Холодовая агглю­тинация" обусловлена наличием в сыворотке особого холодового агг­лютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглю­тинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке.

Химические Факторы. Течение агглютинации зависит от степе­ни концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при со­держании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не насту­пает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавлении 10 % раствора лимоннокислого натрия.

Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодей­ствии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специ­фической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является фено­мен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при ком­натной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп, включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена - бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)1V.

Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязненном крови, Встречается она сравнительно редко и называет­ся панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглю­тинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сыво­роткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях гепатолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выяв­ляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре те­ла, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации.

Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловле­но склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ (ПРОСТОЙ МЕТОД)

В повседневной клинической практике наиболее часто применя­ется определение групп крови по стандартным изогемагглютинирую­щим сывороткам. Суть метода-с помощью стандартных изогемагглю­тинирующих сывороток определяется наличие в исследуемой крови групповых антигенов А и В.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), AB(1V) групп двух серий, изотонический раствор хлорида на­трия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пи­петки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Для определения группы крови используют блюдцеобраз­ные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозначе­ния соответственно стандартным сывороткам.

Методика выполнения:

Определение группы крови производится при температуре не ниже +15° С и не выше +25° С.

2. Осмотреть стандартные гемагглютинируюшие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок год­ности, были правильно расположены по отношению друг к другу.

3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного.

4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандарт­ной сыворотки - первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом.

5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и проколоть стерильной иглой, при этом первую кап­лю крови удалить.

6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на тарелку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а за­тем уголком предметного стекла перенести в капли сыворот­ки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотно­шение исследуемой крови и стандартной сыворотки должно быть 1:10.

7. Место укола пальца обработать спиртом.

8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от­дельной палочкой.

9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто­янно обращая внимание на лунки, где может наступить агглютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агг­лютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия.

10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри­цательной.

Агглютинация наступает обычно в течение первых 10-30 се­кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (агг- лютинаты), которые состоят из эритроцитов.

Мелкие агглютинаты сливаются в более крупные. Сыворотка обычно частично обесцвечи­вается. Если агглютинация не происходит сыворотка остается окра­шенной в красный цвет, агглютинатов в ней нет. Следует помнить, что кровь, содержащая агглютиноген А 2 дает позднюю агглютинацию (на 3-4 минуте).

Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать.

Оценка результатов

1. Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютина­ции эритроцитов во всех лунках - группа крови О (I) первая;

2. Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютиниро­вали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во второй - группа крови А (II) вторая;

3. Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей - группа В (III) третья;

4. Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты во всех лунках - данная кровь относится к четвертой группе AB(IV). Если исследуемая кровь оказалась AB(IV), группы проводится дополнительное контрольное исследование со стандарт­ной сывороткой AB(1V) группы. При отсутствии агглютинации иссле­дуемой крови с сывороткой AB(IV) группы данную кровь можно от­нести к четвертой группе.

Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про­вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ (ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ) (перекрестный способ)

Суть метода - с помощью стандартных изогемагглютинирую­щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро­цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител аир. Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро­цитов 0(1), А(II) и В(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра­нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(1), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек­лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре­зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато­ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки.

3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(1), А(II), В(III), двух серий.

4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(1), А(II), В(III).

5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе­мой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли испытуемой сыворотки.

6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из­меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов.

7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за на­ступлением агглютинации.

Оценка результатов:

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво­ротками и стандартными эритроцитами)

1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти­нация с ними не происходит.

2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет агг­лютинации в трех стандартных сыворотках двух серий - в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина а и β, а в испытуемых эритро­цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы В(III) и со стандартной сывороткой группы 0(1), В(III) - в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови - агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе А(II).

4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы А(II) и со стандартной сывороткой группы А(II), 0(1) - в исследуемых эрит­роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглю­тинин а. Следовательно, кровь относится к группе В(III).

5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю­тинация со стандартными сыворотками - в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от­сутствуют оба агглютинина кровь относится к группе AB(IV).

Примечание. Результат перекрестного способа считается дос­товерным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинируюшими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

Определение группы крови можно произвести с помощью мо­ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны антн-А и антн-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома - это клеточный гибрид, возник­ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло­нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родите­лей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухо­левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им­мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе­ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге­магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100, 200 доз с растворителем, при­ложенным к каждой ампуле по 2, 5, 10, 20 мл соответственно. Лиофилизированный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анто-В.

Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото­нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови.

3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента.

4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А - красный, анти-В - синий).

5. Взять кровь реципиента и донора.

6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую - цоликлон анти-А, во вторую - цоликлон анти-В.

7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи­петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше ка­пли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна.

Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I(0), II(А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV(АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая тарелка, предметные стекла, стерильные копьевидные иглы для прокола кожи пальца, стерильные марлевые шарики, спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением, при температуре от 15 до 25 ° С.

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВ0 выпускают с определённой цветовой маркировкой: I(0) - бесцветная, II (А) - голубая, III (В) - красная, IV(АВ) - жёлтая. Маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки I(0) полос нет, сыворотки II (А) - две полосы синего цвета, сыворотки III (В) - три полосы красного цвета и сыворотки IV(АВ) - четыре полосы жёлтого цвета. Сыворотки хранят при температуре 4-10 ° С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула - сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнения являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, активность - высокая: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее чем через 30 с. Сыворотки с истекшим сроком хранения к использованию непригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на четыре квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты I(0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий I(0), II (А), III (В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьём. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие капли разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки. Затем путём покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путём покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации (рис. 37, см. цв. вкл.).

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зёрнышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зёрен. Возможны следующие четыре комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками I(0), II(А), III(В) групп.

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь - I(0) группы.

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой II(А) группы обеих серий и положительная с сыворотками I(0) и III(В) групп. Исследуемая кровь - II(А) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой I(0) и III(А) групп. Исследуемая кровь - III(В) группы.

4. Сыворотки I(0), II(А), III(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV(АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV(АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV(АВ) группе.

Выявление других комбинаций свидетельствует о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.

Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или, наоборот, выявляется агглютинация при её фактическом отсутствии. Невыявленная агглютинация может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объёма исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 ° С, оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.

Выявление агглютинации при её фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации, если исследование проводят при температуре окружающей среды ниже 15 ° С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 ° С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.

Во всех сомнительных случаях необходимо повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов.

Определение группы крови по системе АВ0 с помощью моноклональных антител анти-А и анти-В (цоликлоны анти-А и анти-В)

Цоликлоны анти-А и анти-В применяют для определения группы крови человека по системе АВ0 вместо стандартных изогемагглютинирующих сывороток путём выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в цоликлонах.

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, полученными в результате слияния мышечных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Названные цоликлоны представляют собой разведённую асцитическую жидкость мышей-носителей гибридомы, содержащую IgM против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВ0-сыворотки.

Определяют группу крови при температуре от 15 до 25 °С. На фарфоровую пластину или маркированную тарелку наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В, рядом наносят каплю исследуемой крови в 10 раз меньшего размера и смешивают отдельными палочками или уголками предметных стекол. Пластинку слегка покачивают и наблюдают за реакцией в течение 2,5 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 с и проявляется образованием мелких красных агрегатов, а затем хлопьев. Возможны следующие варианты реакции агглютинации.

1. Агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В, кровь не содержит агглютиногенов А и В - исследуемая кровь группы I (0) (рис. 38, см. цв. вкл.).

2. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А - исследуемая кровь группы II(А).

3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В - исследуемая кровь группы III (В).

4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-В, эритроциты содержат агглютиногены А и В - исследуемая кровь группы IV(АВ) (табл. 2).

Таблица 2.

Реакция агглютинации исследуемых эритроцитов с цоликлонами анти-А и анти-В

При наличии реакции агглютинации с цоликлонами анти-А и анти- В [группа крови IV(АВ)] для исключения неспецифической агглютинации производят дополнительное контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю (0,1 мл) изотонического раствора смешивают с маленькой (0,01 мл) каплей исследуемой крови. Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность исследуемой крови к IV(АВ) группе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с использованием отмытых стандартных эритроцитов.

Цоликлоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный (анти-А) и синий (анти- В) цвета. Хранят в холодильнике при температуре 2-8 °С. Срок хранения 2 года.

В наше время медицина достигла больших высот. Врачи способны проводить долгие операции и спасать людей даже из самых, казалось бы, безвыходных в плане выживания ситуаций. Однако, в таких случаях приходится сталкиваться с проблемой необходимости переливания крови. Долгое время это было мало осуществимо в связи с тем, что пациенты умирали очень быстро. Но данный вопрос был решен открытием понятия групп крови, а точнее обнаружения на эритроцитах антигенов и, в свою очередь, антител в плазме крови.

В начале двадцатого века Австралийский врач, по совместительству ученый К. Ландштейнер открыл наличие в крови антигенов и антител. Антигены находятся на поверхности эритроцитов. Их бывает 2 вида. Для простоты биологи обозначили их как A и B. В свою очередь антитела содержатся в плазме крови и получили названия α и β. Если A соединить с α, а B с β, начнется процесс сворачивания крови. Данная реакция носит название гемагглютинация.

Таким образом из имеющихся наборов антигенов и антител можно составить 4 типа крови, приведенных в таблице ниже:

Номер группы	Мировое обозначение	Антигены	Антитела
I	0	Отсутствуют	α и β
II	A	A	β
III	B	B	α
IV	AB	A и B	Отсутствуют

Важно! В зависимости от того, какой тип донорской крови предоставляется для переливания, кровь пациента либо сворачивается, либо нет. Первый случай грозит летальным исходом.

Сыворотки для проведения реакции

На текущий момент имеется достаточно большое количество способов определения группы крови. Но большая часть из них рассчитана на анализ в крупных лабораториях. Однако, даже если вы находитесь в маленькой деревушке или в месте, где никак не получится обратиться в подобные учреждения, возможность выявления номера группы крови все равно остается.

Определение группы крови осуществляется с применением четырех специальных стандартных сывороток, которые будут изготавливаться из крови человека. Они выпускаются либо во флакончиках, либо в ампулах по 2-5 мл и соответствуют разным группам крови:

1. 0. Выпускается с белой этикеткой и имеет прозрачный цвет.
2. A. Жидкость голубой окраски. На флакон наносятся две синие полосы.
3. B. Жидкость бледно-розового оттенка. На флаконе присутствуют три полосы той же окраски.
4. AB. Жидкость желтого окраса. На флакон нанесены 4 полосы того же цвета.

Важно! На самом деле указанные реагенты при изготовлении не имеют цвета. Они окрашиваются специально, чтобы при использовании их было невозможно перепутать.

Также на этикетки наносятся:

• титр;
• дата производства;
• срок годности;
• данные об изготовителе;
• серийный номер.

Как определяется группа крови

Чтобы определить группу крови, понадобится:

• плоская тарелка с 8 углублениями;
• стеклянные палочки или пипетки - 8 штук;
• 2 набора сывороток разной серии для исключения возможности ошибок;
• обычные или песочные часы.

На плоскую тарелку помещаются сыворотки в 2 ряда, после чего берутся стеклянные палочки. С их помощью в ряды вносится исследуемая кровь. Этими палочками она размешивается, после чего тарелку начинают покачивать. Если повезет, процесс можно отследить за 10-30 секунд, но лучше это делать до 5 минут, чтобы исключить возможность заторможенности реакции. Затем происходит изучение и расшифровка полученных результатов.

Внимание! В первую очередь следует обратить внимание на кружки, в которые была налита сыворотка II и III групп крови. Интерес представляет наличие мелких хлопьев, появляющихся в результате агглютинации - слипания эритроцитов.

1. Если ни во II, ни III хлопьев нет, а также при дополнительной проверке ни в I, ни IV также ничего не свернулось, значит имеется первая группа крови.
2. Если в результате свертывание отмечается везде, кроме сыворотки II группы, значит исследуемая кровь относится ко второй группе.
3. Если свертывание наблюдается во всех образцах, кроме сыворотки III группы, значит исследуемая кровь относится к одноименной группе.
4. Если сворачивание прошло во всех образцах, кроме сыворотки IV группы, значит анализу была подвержена одноименная группа крови.

Важно! Строго говоря, группу крови можно определить, имея сыворотки только 2 и 3 группы крови. Однако, как можно сделать вывод из сути метода, имеется большое влияние человеческого фактора. По этой причине сыворотки I и IV группы крови используются в качестве дополнительной проверки.

После процедуры используемая посуда должна быть хорошо промыта теплой водой и высушена. Затем ее можно использовать для дальнейших исследований.

Неточности результатов и их причины

Иногда бывает так, что сгустки слипшихся эритроцитов видны не очень четко. Во время проверки зачастую может быть добавлен изотонический раствор хлорида натрия. Он позволяет исключить вероятность ложной агглютинации, заставляя рассыпаться обратно хлопья, получившиеся не в результате процесса свертывания.

Важно! Если результат анализа виден не особо четко, его необходимо переделать и воспользоваться микроскопом, чтобы рассмотреть мелкую агглютинацию.

В случае четко выявленного результата можно сразу точно назвать пациенту его группу крови. Иначе следует обратиться к другим методам проведения анализа.

Не стоит забывать и о возможности ошибок, которые обычно происходят по следующим причинам:

• использование просроченной или слабой сыворотки;
• использование слишком большого количества исследуемой крови по отношению к объему сыворотки;
• реакция проводится намного дольше, чем положено нормативами;
• температура окружающей среды не соответствует нормальной, в результате чего происходит холодовая агглютинация эритроцитов.

Дополнительно стоит заметить, что в процессе высыхания по краям смеси сыворотки и исследуемой крови возможно образование зернистых участков, которые не могут служить показателями реакции.

Использование результата на практике

Как уже упоминалось, определение группы крови проводится для исключения летального исхода во время ее переливания. В идеале пациенту, принимающему кровь - реципиенту - необходимо переливать кровь той же группы, что и у него самого. Однако так получается далеко не всегда. Хотя бы потому, что людей с первой группой крови подавляющее количество - 50%. В то же время они являются универсальными донорами, поскольку у них отсутствуют агглютиногены, которые стимулируют процесс свертывания крови.

Внимание! Что касается пациентов с IV группой крови, то их можно назвать универсальными реципиентами, поскольку их организм способен принять кровь любой группы. В то же время их кровь не может быть перелита представителям другой группы.

Для наглядности совместимости доноров и реципиентов приведем таблицу:

Номер группы	Для каких групп становится донором	Для каких групп становится реципиентом
I	I, II, III, IV	I
II	II, IV	I, II
III	III, IV	I, III
IV	IV	I, II, III, IV

В современном мире знание группы крови жизненно необходимо. От этого, с точки зрения врачей, будет зависеть коэффициент выживаемости из пациентов. С точки зрения обычных людей это шанс в экстренной ситуации сохранить свою жизнь. В связи с этим не лишним будет знать свою группу крови и, по возможности, проставлять ее в паспорт либо другие документы, поскольку риск здоровью и жизни может возникнуть в любой момент.

Видео — Определение группы крови

Видео — Определение группы крови и резус-фактора

Определение группы крови и резус-фактора играет основополагающую роль в случаях, когда речь идет о спасении жизни человека. Именно по этой причине подобное исследование проводят всем пациентам в предоперационный период, беременным женщинам перед родами и во многих других ситуациях, которые могут потребовать срочного переливания. Существует несколько способов определения группы крови с использованием разных лабораторных реагентов, и один из них основывается на применении химических веществ под названием цоликлоны. Что же представляет собой определение группы крови цоликлонами и как проводится процедура?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека . Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Что такое цоликлоны?

Цоликлоны – это антитела, которые получают посредством технологий генной инженерии. Обычно для получения цоликлонов берутся лабораторные мыши – животным вводится специальный препарат, после чего производят забор жидкости из брюшной полости – именно она и содержит необходимые для проведения анализа вещества. С научной точки зрения, цилоклоны можно отнести к иммуноглобулинам М, которые способны реагировать с агглютиногенами – специфическими клетками, присутствующими на поверхности красных кровяных телец.

Именно агглютиногены, а точнее их типы, и служат основой для классификации групп крови: так, у носителей первой группы данные вещества отсутствуют, у обладателей второй имеются агглютиногены типа А и т. д. В ходе проведения процедуры определенные цоликлоны вступают в реакцию с разными типами агглютиногенов, что и позволяет определить группу крови пациента.

Цоликлоны выпускаются в виде жидкости, разлитой во флаконы по 5 мл или 10 мл, причем каждый ее тип имеет специфические характеристики:

• анти-А представляет собой жидкость красноватого цвета;
• анти-В имеет синий оттенок;
• анти-АВ (анти-D) – бесцветный прозрачный раствор.

Преимущество цоликлонов перед другими химическими реагентами заключается в том, что они не требуют специальной подготовки к анализу и позволяют провести его в кратчайшие сроки. Кроме того, они не являются клетками человеческого организма, поэтому инфекционное заражение медперсонала при контакте с веществами полностью исключено.

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

Важно! Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Интерпретация результатов процедуры проводится визуально – жидкости либо полностью соединяются, либо наступает склеивание (агглютинация) кровяных телец, вследствие чего биоматериал сворачивается и в нем образовываются мелкие хлопья.

Расшифровка осуществляется следующим образом:

• если реакция отсутствует во всех образцах биоматериала, его можно причислить к I группе (это означает, что агглютиноген в клетках крови отсутствует);
• вступление кровяных клеток в реакцию с цоликлоном анти-А свидетельствует о том, что кровь исследуемого человека относится к II группе;
• склеивание эритроцитов с цоликлоном анти-В – признак III группы крови;
• если биоматериал вступил в реакцию со всеми веществами, то он принадлежит к IV группе.

Для проверки точностии результатов и определения резус-фактора к образцам биоматериала добавляют цоликлон АВ – если произошла реакция агглютинации, он в крови определяется как положительный (отсутствие склеивания эритроцитов говорит об отрицательном резус-факторе). Чтобы исключить заболевания, при которых агглютинация происходит при контакте с любыми раздражителями, капля крови пациента смешивается с физраствором. В случаях, когда визуально определить результат невозможно, анализ переделывают, а образцы рассматривают под микроскопом.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Что может повлиять на результат?

Цоликлоны чувствительны к факторам окружающей среды, соответственно, при проведении исследования необходимо соблюдать температурный режим и правила гигиены – помещение должно быть чистым и сухим, а отдельные образцы крови не должны контактировать друг с другом. Кроме того, при некоторых патологиях кровь человека способна менять свои характеристики, вследствие чего проведение исследования существенно усложняется. Так, при дисфункции печени, селезенки, септических процессах и обширных ожогах у пациентов наблюдается так называемая панагглютинация крови – эритроциты выпадают в осадок даже при реакции с физраствором. У больных лейкозом и новорожденных младенцев наблюдается иная картина – кровяные тельца не реагируют на раздражители, из-за чего отследить реакцию склеивания становится невозможно.

Обратите внимание! Кроме того, у близнецов, людей с пересаженным костным мозгом или у тех, кто перенес неоднократное переливание крови, в биологических жидкостях уживаются разные типы эритроцитов – соответственно, при проведении анализа наблюдаются непредсказуемые результаты. Для определения группы в вышеперечисленных случаях требуются дополнительные лабораторные анализы с использованием специального оборудования.

Анализ с использованием цоликлонов – один из наиболее простых и точных способов определения группы крови человека. При соблюдении всех правил и условий проведения процедуры вероятность ошибочного результата сводится к минимуму, поэтому химические реагенты данного типа применяются практически во всех современных лабораториях.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов

Материалы публикуются для ознакомления, и не являются предписанием к лечению! Рекомендуем обратиться к врачу-гематологу в вашем лечебном учреждении!

Группа крови и резус-фактор — особые белки, которые определяют ее индивидуальный характер, так же, как цвет глаз или волос у человека. Группа и резус имеют большое значение в медицине при лечении кровопотерь, болезней крови, а также влияют на формирование организма, функционирование органов и даже психологические особенности человека.

Понятие о группе крови

Еще врачи древности пытались восполнять кровопотерю путем переливания крови от человека человеку и даже от животных. Как правило, все эти попытки имели печальный исход. И только в начале ХХ века австрийским ученым Карлом Ландштейнером были обнаружены различия в группах крови у людей, которые представляли собой особые белки в эритроцитах — агглютиногены, то есть вызывающие реакцию агглютинации — склеивание эритроцитов. Она-то и являлась причиной гибели больных после переливания крови.

Установлено 2 основных вида агглютиногенов, которые были условно названы А и В. Склеивание эритроцитов, то есть несовместимость крови, происходит в случае, если агглютиноген соединяется с одноименным белком — агглютинином, содержащимся в плазме крови, соответственно, а и b. Значит, в крови человека не может быть одноименных белков, вызывающих склеивание эритроцитов, то есть если есть агглютиноген А, то в ней не может быть агглютинина а.

Обнаружено также, что в крови могут быть оба агглютиногена — А и В, но тогда она не содержит ни одного вида агглютининов, и наоборот. Все это и есть признаки, определяющие группу крови. Поэтому при соединении одноименных белков эритроцитов и плазмы развивается конфликт по группе крови.

Виды групп крови

На основании этого открытия у людей выделено 4 основных вида группы крови:

• 1-я, не содержащая агглютиногенов, но содержащая оба агглютинина а и b, это — самая распространенная группа крови, которой обладают 45% населения планеты;
• 2-я, содержащая агглютиноген А и агглютинин b, определяется у 35% людей;
• 3-я, в которой есть агглютиноген В и агглютинин а, ее имеют 13% людей;
• 4-я, содержащая оба агглютиногена А и В, и не содержащая агглютининов, такая группа крови самая редкая, она определяется лишь у 7% населения.

В России принято обозначение групповой принадлежности крови по системе АВ0, то есть по содержанию в ней агглютиногенов. В соответствии с этим таблица групп крови выглядит следующим образом:

Групповая принадлежность крови передается по наследству. Может ли поменяться группа крови — на этот вопрос ответ однозначен: не может. Хотя истории медицины известен единственный случай, связанный с генными мутациями. Ген, определяющий группу крови, находится в 9-й паре хромосомного набора человека.

Важно! Суждение о том, какая группа крови подходит всем, сегодня утратило актуальность, так же, как и понятие универсального донора, то есть обладателя 1-й (нулевой) группы крови. Открыто множество подвидов групп крови, и переливается только одногруппная кровь.

Резус-фактор: отрицательный и положительный

Несмотря на открытие Ландштейнером групп крови, все же продолжали иметь место трансфузионные реакции во время переливания. Ученый продолжал свои исследования, и совместно со своими коллегами Винером и Левайном ему удалось обнаружить еще один специфический белок-антиген эритроцитов — резус-фактор. Вначале он был выявлен у человекообразной обезьяны макаки-резус, откуда и получил свое название. Оказалось, что резус присутствует и в крови большинства людей: у 85% населения этот антиген имеется, а у 15% он отсутствует, то есть у них отрицательный резус-фактор.

Особенность резус-антигена состоит в том, что при попадании в кровь людей, его не имеющих, он способствует выработке антирезус-антител. При повторном контакте с резус-фактором эти антитела дают тяжелую гемолитическую реакцию, которая называется резус-конфликтом.

Важно! Когда резус-фактор отрицательный — это значит не просто отсутствие в эритроцитах резус-антигена. В крови могут присутствовать антирезусные антитела, которые могли образоваться во время контакта с резус-положительной кровью. Поэтому обязателен анализ на наличие резус-антител.

Определение группы крови и резус-фактора

Группа крови и резус-фактор подлежат обязательному определению в следующих случаях:

• для проведения переливания крови;
• для пересадки костного мозга;
• перед любой операцией;
• при беременности;
• при заболеваниях крови;
• у новорожденных при гемолитической желтухе (резус-несовместимости с матерью).

Однако в идеале сведения о групповой и резус-принадлежности должны быть у каждого человека — как у взрослого, так и у ребенка. Никогда нельзя исключить случаи тяжелой травмы или острого заболевания, когда может срочно понадобиться кровь.

Определение группы крови

Определение группы крови проводится специально полученными моноклональными антителами по системе АВ0, то есть агглютининами сыворотки, которые дают склеивание эритроцитов при контакте с одноименными агглютиногенами.

Алгоритм определения группы крови следующий:

1. Подготавливают цоликлоны (моноклональные антитела) анти-А — ампулы розового цвета, и анти-В — ампулы синего цвета. Подготавливают 2 чистых пипетки, стеклянные палочки для смешивания и предметные стекла, одноразовый шприц на 5 мл для взятия крови, пробирку.
2. Выполняют забор крови из вены.
3. На предметное стекло или специальный маркированный планшет наносят по большой капле цоликлонов (0,1 мл), к ним подмешивают отдельными стеклянными палочками маленькие капли исследуемой крови (0,01 мл).
4. Наблюдают за результатом 3-5 минут. Капля с примешанной кровью может быть гомогенной — реакция минус (-), или выпадают хлопья — реакция плюс или агглютинация (+). Оценка результатов обязательно проводится врачом. Варианты исследования определения группы крови представлены в таблице:

Определение резус-фактора

Определение резус-фактора выполняется аналогично определению группы крови, то есть с помощью моноклонального антитела сыворотки к резус-антигену. На специальную чистую белую керамическую поверхность наносят большую каплю реагента (цоликлона) и малую каплю только что взятой крови, в таких же пропорциях (10:1). Кровь осторожно смешивают стеклянной палочкой с реагентом.

Определение резус фактора цоликлонами занимает меньше времени, потому что реакция наступает уже через 10-15 секунд. Однако необходимо выдержать максимальный срок — 3 минуты. Так же, как и в случае определения группы крови, пробирку с кровью направляют в лабораторию.

В медицинской практике сегодня широко применяют удобный и быстрый экспресс-метод определения групповой принадлежности и резус-фактора с помощью сухих цоликлонов, которые разводятся стерильной водой для инъекций непосредственно перед исследованием. Метод называется «Эритротест-группокарт», он очень удобен как в условиях клиник, так и в экстремальных, и в полевых условиях.

Характер и здоровье человека по группе крови

Кровь человека как его специфический генетический признак еще до конца не изучена. В последние годы учеными открыты варианты подгрупп крови, разрабатываются новые технологии определения совместимости и так далее.

Крови также приписывается свойство влиять на здоровье и характер ее владельца. И хотя этот вопрос остается спорным, все же многолетними наблюдениями подмечены интересные факты. Например, японские исследователи считают, что можно определить характер человека по группе крови:

• обладатели 1-й группы крови — люди волевые, сильные, общительные и эмоциональные;
• обладатели 2-й группы отличаются терпеливостью, скрупулезностью, упорством, трудолюбием;
• представители 3-й группы являются творческими личностями, но в то же время слишком впечатлительны, властны и капризны;
• люди с 4-й группой крови живут больше чувствами, отличаются нерешительностью, порой неоправданно резки.

Что касается здоровья в зависимости от группы крови, то считается, что оно является наиболее крепким у большинства населения, то есть при 1-й группе. Лица со 2-й группой склонны к болезням сердца и онкологическим заболеваниям, для обладателей 3-й группы характерен слабый иммунитет, низкая устойчивость к инфекциям и стрессам, а представители 4-й группы склонны к сердечно-сосудистой патологии, заболеваниям суставов, раку.