Реакция пассивной гемагглютинации (рпга) treponema pallidum hemagglutionation assay (tpha). Рпга или реакция пассивной гемагглютинации что это за анализ крови Ложноположительные результаты нетрепонемных тестов

Возможно, Вам дали направление в лабораторию на анализ РПГА, но Вы не очень понимаете, что означает эта аббревиатура. Что это такое и насколько все серьезно Вы подробно узнаете из данной статьи.

Помимо пациентов с выраженными симптомами венерических заболеваний, направление на РПГА анализ могут дать людям, проходящим медицинское обследование с целью устройства на работу, перед проведением хирургической операции, или при становлении женщины на учет по беременности. Здесь нет ничего страшного и зазорного, просто, таким образом, специалисты анализируют население на предмет серьезных половых заболеваний, что позволяет своевременно выявить носителей инфекции и оказать им должную медицинскую помощь еще до развития осложнений.

Если Вы практикуете незащищенный секс (независимо от того, как хорошо Вы знакомы с сексуальным партнером, ведь многие люди сами не подозревают о своем заражении), либо подозреваете своего постоянного партнера, Вы можете спокойно сдать кровь и в скором времени узнать результат и развеять страх от неизвестности. Чтобы получить направление на лабораторный анализ не обязательно идти к венерологу. Достаточно обратиться с этой просьбой к своему терапевту, либо рассказать о беспокоящих подозрениях гинекологу или урологу.

Расшифровка анализа

РПГА расшифровывается, как реакция пассивной гемагглютинации. Знать ее значение необходимо при определении наличия возбудителя тяжелого венерического заболевания - сифилиса. Если человеческий организм поддался заражению, по результатам анализа крови это можно точно выявить.

В ходе исследования специалист может обнаружить агглютинацию эритроцитов, означающую, что красные кровяные клетки начали склеиваться между собой и выпадать в осадок под каким-то негативным воздействием. В данном случае это бледная трепонема, обитающая на верхних слоях, и провоцирующая поражение организма сифилисом.

Механизм заражения достаточно прост:

Есть здоровый организм;
В него попадает патогенный микроорганизм - бледная трепонема;
Развивается иммунный ответ;
Это в свою очередь провоцирует выработку антител, которые и являются признаком имеющейся венерической болезни.

Для анализа крови на РПГА характерно два вида антител, указывающих на наличие или отсутствие возбудителя сифилиса:

Неспецифический и нетрепонемный;
Специфический и трепонемный.

Данная методика исследования была впервые применена в 1965-ом году. С тех пор она активно используется для диагностики сифилиса. Ее высокая чувствительность позволяет не только обнаружить патоген, но и определить стадию, на которой протекает заболевание.

Известно четыре формы поражения сифилисом:

Первичная;
Вторичная;
Третичная;
Латентная.

При развивающихся аутоиммунных патологиях, на фоне некоторых вирусных заболеваний, в организме больного может возрасти количество неспецифических антител, которые воспримутся анализом РПГА, как ложная реакция.

РПГА анализ крови показан всем пациентам, у которых были жалобы, схожие на признаки сифилиса, либо когда врач подозревает нечто подобное благодаря своему большому практикующему опыту.

Также очень важно проходить подобное обследование некоторым представительницам женского пола, которые планируют в скором времени забеременеть. Потому что в их случае нужно пролечиться, а после только думать о рождение ребенка, если, конечно, им важно его здоровье.

Этот анализ нередко входит в группу обязательных тестов перед оперативным вмешательством. Благодаря полной диагностике организма можно спланировать ход операции, и ее благоприятный исход.

Как сдавать этот анализ

Вы наверное понимаете, насколько серьезный диагноз может быть поставлен по результатам РПГА анализа.

Иногда заключение бывает ошибочным по причине некачественной подготовки пациента к исследованию, отчего ложноположительный ответ становится поводом для назначения бесполезного или наоборот, вредящего лечения.

Чтобы не допустить искажение результатов теста достаточно следовать нижеперечисленным рекомендациям:

Никакой пищи накануне сдачи крови на РПГА употреблять нельзя. Этот анализ, как и большинство других, производится строго натощак;
Любые напитки, кроме простой чистой воды также не должны попасть в организм в день, отведенный под анализ. Если будете пить разрешенную жидкость, то ее объем должен быть минимальным, чтобы он никак не повлиял на состав крови;
Обычно, чтобы человек не морился голодом и жаждой, забор крови происходит в утренние часы;
В это же утро лучше вовсе не курить. Вещества, содержащиеся в дыму и парах, могут дать негативную реакцию, из-за чего результаты будут неверно расшифрованы лаборантом;
Запрет возлагается также и на алкоголь. Причем пить спиртное лучше прекратить еще за несколько дней до исследования.

Придя в специальный кабинет, пациент должен оголить свою руку от одежды, чтобы медсестра смогла взять кровь из вены. Процедура эта известна практически всем. Она относительно безболезненна и быстра. По ее окончанию Вам скажут, когда результаты анализа РПГА будут готовы, чтобы их можно было забрать.

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

Показать всё

1. Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

1.1. Прямые методы

1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

1.2. Непрямые методы

Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

1 Нетрепонемные тесты:
- Реакция Вассермана (РСК);
- Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
- Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
- Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
- Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
2 Трепонемные тесты:
- Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
- Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
- Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
- Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
- Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса

1.3. Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
4 Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
2 Получение быстрого ответа;
3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
3 Злокачественные новообразования.
4 Вирусные и бактериальные инфекции.
5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
6 Беременность.
7 Употребление алкоголя.
8 Приём жирной пищи.
9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

1 сравнительно высокая чувствительность;
2 сравнительно высокая специфичность;
3 легкость выполнения;
4 малая стоимость реактивов;
5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
3 От 50 до 100 - положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Сейчас для проведения РПГА пользуются стандартизированными тест-наборами.

В них есть все необходимое для анализов:

Флакон с эритроцитами, которые на поверхности содержат антигены бледной трепонемы штамма Nichols.
Такая же емкость, но уже с «чистыми» красными кровяными тельцами (нужны для контроля).
Буферный раствор для разведения сыворотки пациента (ниже расскажем, зачем это делают).
Сыворотка от человека, заведомо больного сифилисом, тоже используется для контроля (К+).
Сыворотка от заведомо здорового человека (К–).
Пластиковая планшетка с пронумерованными луночками для смешивания образцов и оценки результатов.

Каждый тест набор содержит запас реактивов для постановки определенного числа проб. Обычно – 100. Поэтому сыворотку иногда сохраняют, пока не наберется нужное число образцов для исследования.

Методика проведения анализа РПГА

Реакция пассивной гемагглютинации может предоставить два типа результатов:

Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли в исследуемом образце антитела к возбудителю.
Количественный. Позволяет оценить интенсивность синтеза иммуноглобулинов и таким образом отследить активность инфекции.

Как правило, сначала проводится качественная оценка, а положительные образцы отбираются для количественных исследований.

Алгоритм простого выявления инфицированности таков:

В лунки планшета вносятся одинаковые дозы исследуемых образцов. На одного пациента выделяется ряд из шести лунок.
В первые две капают его плазму, разведенную буфером 1:20.
Следующая пара служит для контроля, в нее помещают сыворотку К+. И еще две лунки для материала К–.
Затем вносят меченные антигеном эритроциты в первую лунку из каждой пары. Во вторую – эритроциты чистые.
Планшет некоторое время покачивают для тщательного перемешивания реактивов и оставляют в покое. Минимум – 45 минут. Можно и на всю ночь.

Результаты оцениваются визуально. Если реакция отрицательная, эритроциты оседают на дно сферического углубления лунки.

Это должно произойти в обеих лунках с образцами пациента и там, куда были добавлены чистые контрольные эритроциты тест-системы.

При положительном результате, эритроциты не собираются в одном месте, а равномерно распределены по всему дну лунки. Подобная картина должна быть там, где меченые стандартным антигеном эритроциты смешиваются с образцом больного и сывороткой К+. Таким образом проводится контроль реакции, что позволяет избежать ложных результатов.

Количественная оценка РПГА

Образцы с положительным результатом отбирают и несколько раз разводят буферным раствором (титруют). Перед каждым разведением, сыворотку капают в соответствующую лунку планшета и отмечают над ней степень суммарного разведения. Затем к образцам добавляют эритроциты с антигеном трепонемы и определяют, при каком титре еще отмечается положительный результат. Это – количественный анализ крови на сифилис РПГА, он показывает концентрацию антител к возбудителю.

Результаты оценивают так:

4+ означает, что эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем. Появление складчатости края говорит о высоких концентрациях антител в исследуемом образце. Реакция положительная.
3+ ставят, если круг четкий, но часть эритроцитов «стекает» к центру. Картина напоминает расправленный зонтик, расценивается как положительная реакция.

2+ выглядит как широкое кольцо с тенденцией к просветлению в центре. Слабоположительная.
1+ означает сомнительный результат. В лунке – узкое колечко. Требует повтора через 1-2 недели.
При отрицательном анализе, эритроциты формируют пуговку в центре лунки.

Есть, правда, серорезистентные случаи сифилиса, при которых болезни уже вроде бы нет, а антитела сохраняются длительное время. Поэтому РПГА иногда требует подтверждения другими методами.

При необходимости сдать РПГА и пройти любое обследование на сифилис, обращайтесь к грамотным венерологам.

Анализ крови РПГА - одно из важнейших исследований, которое помогает определить наличие патогенных возбудителей в организме.

Метод РПГА очень часто используется при подозрении на сифилис, инфицирование кишечного тракта, коклюш и другие опасные патологии. Когда выписывается направление на подобное исследование, пациенты интересуются, как сдают биоматериал и насколько достоверные результаты дает методика. Об этом и пойдет речь далее.

Что такое РПГА и какие имеет особенности

Далеко не каждый человек знает, что это такое и как расшифровывается аббревиатура РПГА. Под этим сокращением подразумевается реакция пассивной гемагглютинации, методика нужна для определения патогенного процесса в организме.

Этот тест выявляет антигены бледной трепонемы (люис) - патогенного микроорганизма, провоцирующего возникновение сифилиса. Если обследуемый здоров и не страдает от каких-либо хронических заболеваний, при попадании в организм бледной трепонемы иммунитет начинает активно вырабатывать антитела.

Наличие в исследуемом биоматериале антител бледной трепонемы - основание для диагностирования сифилиса.

Условно тестирование на сифилис можно разделить на 2 вида:

специфическое;
неспецифическое.

Классификация анализа на категории зависит от вида антител, обнаруженных в полученном образце крови. Несмотря на то что впервые такой метод диагностики был проведен в 1965 году, тестирование оказалось настолько эффективным и результативным, что сегодня оно до сих пор не теряет актуальности.

Несомненным достоинством диагностики является то, что она позволяет обнаружить инфекцию на любом этапе развития, в том числе в латентной стадии.

Показания к проведению

Врачи советуют сдать анализ РПГА в следующих случаях:

у пациента проявляются клинические симптомы сифилиса (появление эрозий, язв, увеличение лимфоузлов) и регионарной лимфаденопатии; в этом случае РПГА на сифилис является незаменимым тестом, поскольку позволяет выявить болезнь на первичной, вторичной и третичной стадии;
возникновение признаков очаговой или диффузной алопеции;
если человек имел половой контакт с носителем сифилиса;
человек хочет стать донором, сдавать кровь и плазму;
РПГА входит в ежегодное профилактическое обследование, которое назначается работникам разных госучреждений;
при оформлении медицинской книжки;
при госпитализации.

Какие заболевания можно выявить в ходе диагностики

Чаще всего положительный результат теста свидетельствует о наличии сифилиса (в 70% случаев) — как врожденного, так и приобретенного, а также может говорить о таких патологиях:

ВИЧ-инфекция;
разные формы гепатита;
недавно перенесенный инфаркт миокарда;
возвратный тиф;
туберкулез;
наличие венерических заболеваний;
клещевой боррелиоз;
дифтерия;
диффузные заболевания соединительной ткани;
злоупотребление наркотическими веществами (вводимыми путем инъекций);
наличие воспалительного процесса в ротовой полости или в районе гениталий;
формирование новообразований злокачественной природы;
инфекционный мононуклеоз.

Чтобы получить достоверные сведения, сдавать кровь нужно с учетом всех врачебных рекомендаций, в противном случае возбудитель сифилиса может быть не выявлен.

Почему для диагностики сифилиса назначается именно РПГА

Часто пациенты задаются вопросом, почему при подозрении на сифилис назначают именно РПГА. Специалисты уверяют, что тестирование является столь популярным, поскольку в 99% случаев дает правильный результат.

Реакция агглютинации не произойдет, только если в организме отсутствуют антитела трепонемы, в противном случае обследование обязательно покажет их присутствие.

Медицинская практика показывает, что чувствительность теста очень высока, причем положительная реакция будет выявлена даже при скрытых стадиях заболевания. Благодаря высокой результативности тест не теряет актуальности даже в настоящее время.

Использование РПГА при других патологиях

Сдачу биоматериала на данное исследование часто назначают при подозрении на коклюш, на брюшной тиф, на иерсиниоз (острое инфекционное заболевание ЖКТ). Такая востребованность обусловлена тем, что по чувствительности и результативности РПГА превосходит практически все серологические анализы.

Тест помогает определить большую часть недугов, вызванных патогенными клетками и риккетсиями. При этом в роли антигенов можно использовать ингредиенты бактериальных вакцин, бактериальные экстракты (с коревым или коклюшным диагностикумом), очищенные антигены всевозможных микроорганизмов.

Основные преимущества метода

Данная методика активно используется по всему миру не только потому, что она является очень результативной, но и из-за определенных преимуществ:

проведение теста не представляет сложности, от пациента требуется лишь сдать кровь;
для проведения исследования не нужно специальное оборудование;
исследование не занимает много времени, обычно пациенту оглашают результат в течение 24 часов;
тест имеет высокую чувствительность и специфичность к сифилису.

Особенности проведения

Для осуществления тестирование требуется венозная кровь. Чтобы расшифровка была достоверной, пациенту необходимо ответственно подойти к подготовке к анализу и строго соблюдать врачебные советы.

сдавать биологический материал разрешено только на пустой желудок;
перед мероприятием (если сдача крови осуществляется днем или вечером) разрешено пить только минеральную воду без газов, употреблять жидкость нужно в небольших объемах;
за пару часов до сдачи биоматериала запрещено курить;
категорически запрещено употреблять спиртные напитки за двое суток до процедуры;
если пациент принимает какие-либо лечебные препараты, об этом непременно нужно предупредить лечащего врача;
если человек чувствует себя плохо, забор крови лучше перенести на другой день, поскольку это может негативно сказаться на расшифровке результата.

Важнейшим этапом является подбор подходящей клиники. Кровь лучше сдавать в современном диагностическом центре с хорошей репутацией.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Расшифровка результатов

Чтобы выявить наличие патологии, к полученной крови нужно добавить специальную сыворотку. Если в организме человека присутствуют трепонемы, произойдет реакция агглютинации, вследствие чего эритроциты выпадут в осадок.

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте. Пассивная гемагглютинация показывает не только присутствие антител, но также дает медику возможность определить их количество.

Положительный результат

Если тест показывает положительную реакцию, это свидетельствует о присутствии возбудителя болезни. Чтобы поставить более точный диагноз, пациента нужно направить на дополнительную лабораторную и инструментальную диагностику.

Неотъемлемым этапом обследование является проверка всех членов семьи и людей, с которыми инфицированный человек вступал в половой контакт.

Как показывает медицинская практика, примерно у 5% пациентов в ходе тестирования проявляется ложноположительная реакция, что может произойти при игнорировании подготовительного этапа, а также при:

формировании онкологических новообразований;
патологии соединительной ткани;
наличии гепатита разных форм;
ВИЧ-инфекции.

Также слабоположительный результат может проявиться при беременности. Ложная “+” реакция практически всегда сопровождается низким титром. Интересным моментом является то, что если человек хотя бы раз болел сифилисом, реакция РПГА всегда будет положительной.

Исключение составляют только те случаи, когда сифилис был выявлен на ранней стадии и после этого сразу началась интенсивная терапия.

Отрицательный результат

Тестирование дает отрицательный ответ в таких случаях:

у пациента в организме отсутствуют патогенные микроорганизмы, являющиеся возбудителем сифилиса;
с момента заражения прошло менее 3 недель, и иммунитет еще не начал производить антитела;
забор крови из вены производился неправильно.

Даже если тестирование показало “-”, специалисты все же рекомендуют пройти дополнительные анализы для подстраховки, чтобы убедиться, что патогенные микроорганизмы отсутствуют.

Точность результата

Многочисленные клинические исследования подтвердили, что такое эта методика дает гарантированно правильный результат, если анализ проводился при соблюдении всех правил и пациент строго придерживался врачебных рекомендаций перед забором крови.

Если тестирование дало положительный ответ, вероятность того, что человек инфицирован сифилисом, составляет более 95% .

Неправильная реакция может проявиться только в тех случаях, если с момента инфицирования прошло слишком мало времени либо лаборант не соблюдал инструкцию при исследовании.

Что касается ложноположительного результата, то он может быть, если диагностика проводилась при наличии инфекционных заболеваний или патологических состояний.

Ложный результат отличается от истинного положительного тем, что он очень быстро становится отрицательным, если тестирование провести повторно через 2 недели.

На данный момент анализ РПГА до сих пор остается самым эффективным и достоверным тестом определения сифилиса и прочих опасных патологий. Поэтому при подозрении на наличие многих заболеваний первым делом медики направляют пациента на РПГА.

Одним из наиболее важных анализов крови для организма является анализ на РПГА. С помощью него можно определить наличие в организме возбудителей такого заболевания как сифилис. Данный анализ признан одним из наиболее достоверных способов определения поражения организма сифилисом. Познакомимся с ним более подробно.

Под аббревиатурой РПГА подразумевается особая реакция, выявляющая в организме пассивную гемагглютинацию. С помощью такой реакции можно обнаружить процесс агглютинации . При чем в ходе данного процесса выявляется наличие на поверхностных слоях многих из них антигенов бледной трепонемы. Данный организм является возбудителем сифилиса.

Попадая в организм здорового человека, бледная трепонема провоцирует развитие иммунного ответа. В ходе этого в организме наблюдается выработка не специфического или нетрепонемного и специфического или трепонемного видов антител.

Наличие в сданном образце крови антител бледной трепонемы и является основательным подтверждением сифилиса в лабораторных условиях.

Все проводимые в лаборатории серологические исследования подразделяются на две группы:

Специфический тип исследования (трепонемный);
Неспецифический тип исследования (нетрепонемный).

Подразделение исследований на данные группы основывается на виде антител, которые обнаруживаются в на РПГА. Определение реакции пассивной гемагглютинации или РПГА, является специфическим типом проведения исследований в отношении возбудителя сифилиса.

Реакция протекает в присутствии антител антитрепонемной природы. Впервые данную реакцию начал практиковать с 1965 года один из ученых и сразу получил широкое признание среди коллег и пациентов. Сегодня с помощью данного метода с успехом диагностируют такое заболевание человеческого организма как сифилис. А сама методика его определения относится к категории специфических (трепонемных) тестов.

С помощью этого высокочувствительного способа диагностирования с легкостью определяется наличие в организме любой стадии сифилиса:

Первичной
Латентной
Вторичной
Третичной

Больше информации о сифилисе можно узнать из видео.

При сдаче крови на РПГА с точностью до мельчайших долей подтверждаются данные от реакций микропреципитации. РПГА позволяет выявить ложноположительные случаи развития заболевания, полученные в ходе проведения .

В некоторых случаях, метод РПГА может спровоцировать ложноположительный результат у больного.

Это бывает если у человека развиты аутоиммунные заболевания. При поражении организма человека определенной группой вирусных болезней, в ходе развития которых, у больного увеличивается число неспецифических антител, данные РПГА также могут быть ложными. Причиной этому является использование данным методом сенсибилизированных эритроцитов.

Когда необходима сдача крови на РПГА?

Анализ РПГА назначается больному в случае возникновения подозрений на развитие в его организме любых стадий сифилиса. Кроме этого данный анализ необходим перед отдельным категориям женщин. Именно на ранних сроках выявление данного заболевания позволит назначить соответствующее лечение и планировать беременность, с целью рождения здорового малыша.

Сдача крови на определение в организме сифилиса назначается и при подготовке пациента к назначенной операции. Именно в этом случае возможен удачный исход оперативного вмешательства в организм. Также подтверждение наличия в организме возбудителей сифилиса позволит врачам планировать ход предстоящей операции таким образом, чтобы ожидаемый лечебный эффект был максимальным.

Определение в крови агентов сифилиса методом РПГА важно и для проверки доноров перед сдачей ими крови.

Благодаря РПГА в данном случае удается предотвратить сотни случаев заражения реципиентов кровью больных сифилисом. В тоже время, известно много случаев, когда люди приходят в пункты сдачи крови в качестве доноров, а сдав ее на РПГА узнают, что больны сифилисом.

на определение в его организме возбудителей сифилиса, проходит некоторое количество времени и становятся известны его результаты. Обычно, РПГА дает положительный показатель по прошествии четырех недель, следующих за первичным инфицированием.

Во многих случаях, первичная стадия развития болезни характеризуется пониженными показателями, ее данные таковы: меньше 1:320. Вторичная стадия сифилиса сопровождается увеличением показаний от титрования: чуть больше 1:320. Скрытый сифилис дает вновь заниженные показатели титров.

Пройдя назначенный курс лечения установленной стадии сифилиса, анализ крови на РПГА у данного больного по-прежнему показывает положительный результат.

И это является не единичным случаем, а массовым и подтверждается на протяжении всей жизни у данной категории людей.

Подготовка и сама процедура анализа

Перед сдачей крови на наличие в ней возбудителей такого заболевания как сифилис, .

Ведь именно искажение данных такого важного анализа может стать причиной назначения больному неправильного лечения, а это, как известно, может стать причиной развития в организме других патологий.

Подготовку к проведению данного анализа довольно проста:

Для начала следует отказать от любого приема пищи перед сдачей крови на РПГА. Другими словами на анализ следует приходить натощак.
Употреблять значительное количество жидкостей перед сдачей крови на РПГА также не желательно. Компоненты принимаемых больным напитков также могут отразиться на результатах данного анализа.
Сдавать данный анализ лучше всего в первой половине дня, так как вам будет довольно сложно обходиться без пищи и воды в течение всех суток.
Перед проведением анализа на РПГА пациенту рекомендуют воздержать от курения в течение тридцати минут. Содержащиеся в табачном дыме вещества, способны искажать достоверность результатов данного анализа.
Сама процедура взятия образца крови довольно простая, и практически безболезненна. После процедуры, специалист лаборатории обязательно назначает время, когда можно будет прийти за готовыми результатами.

Понравилась статья? Поделитесь ей

Распечатать статью